一种新的PrP无细胞构象转化系统的建立

作者：张瑾; 王小凡; 高建梅; 李锋; 韩俊; 陈岚; 张宝云; 周伟; 刘勇; 董小平

来源：病毒学报, 2005, (04): 264-268.

DOI：10.3321/j.issn:1000-8721.2005.04.005

• PrP
• 原核表达
• 生物素标记
• 无细胞转化

PrP细胞外构象转化系统已经被一些实验室用于朊病毒的研究,但在反应体系中往往需要使用放射性同位素。为了建立一种安全方便的PrP无细胞构象转化系统用于TSE发病机制的研究,通过PCR方法获得仓鼠PrP(HaPrP)全长基因,克隆至原核表达载体pQE30,在大肠杆菌中表达并纯化出分子量为27kDHaPrP蛋白,Westernblot证实可与PrP特异性单克隆抗体反应。将纯化蛋白在体外标记生物素(Biotin-7-NHS),与纯化的scrapie263K毒株仓鼠感染脑组织PrPSc蛋白共同孵育4天后,经蛋白酶K消化,Westernblot检测,证明存在一条抵抗蛋白酶K消化的、被亲和素特异性识别的条带,其分子量约为20kD。这表明HaPrPsen可以被转化为HaPrPres。实验表明,可以利用原核系统取代真核系统表达PrP,并用生物素标记取代35S标记纯化蛋白,建立一个更加安全方便的无细胞构象转化系统,用于朊病毒的研究。

• 单位
  西安交通大学; 基础医学院; 中国协和医科大学; 中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所