补阳还五汤对高糖培养的人视网膜微血管内皮细胞自噬和血管形成的干预作用

作者：陈凯铭; 陈子扬; 石颖; 胡艳红^*; 胡俊; 陈胜

来源：中国中医眼科杂志, 2023, 33(02): 105-110.

DOI：10.13444/j.cnki.zgzyykzz.2023.02.002

• 补阳还五汤
• 高糖
• 人视网膜微血管内皮细胞
• 自噬
• 血管形成
• 糖尿病视网膜病变

目的 探究补阳还五汤(BYHW)对高糖培养的人视网膜微血管内皮细胞(HRCECs)自噬影响和血管形成的干预作用。方法 将HRCECs随机分为对照组(CG)、模型组(MG)、BYHW组、自噬抑制剂3-甲基腺嘌呤(3-MA)组。除CG组外，其余各组细胞于25 g/L葡萄糖环境中培养建立高糖损伤模型，BYHW组在MG组的基础上加入5 mg/mL的BYHW水提液，3-MA组加入40μM的3-MA，各组细胞均孵育24 h。采用血管形成实验检测HRCECs血管生成情况，划痕实验检测细胞迁移能力，实时荧光定量PCR(RT-qPCR)和Western Blot法分别检测细胞中微管相关蛋白1A/1B-轻链3(LC3)、苄氯素1(Becline-1)的mRNA和蛋白表达水平。结果 (1)血管形成：与CG组比较，MG组血管形成数升高(t=7.747,P=0.000)；与MG组比较，BYHW、3-MA组血管形成数降低(tBYHW=-6.303,P=0.000;t3-MA=-4.596,P=0.002)，差异均有统计学意义。而BYHW、3-MA组血管形成数比较，差异无统计学意义(P>0.05)。(2)迁移能力：与CG组比较，MG组HRCECs迁移率升高(t=14.035,P=0.000)；与MG组比较，BYHW、3-MA组HRCECs迁移率降低(tBYHW=-9.247,t3-MA=-5.358，均P=0.000)；与BYHW组比较，3-MA组HRCECs迁移率升高(t=-3.890,P=0.003)，差异均有统计学意义。(3)自噬：与CG组比较，MG组LC3 mRNA、蛋白表达水平升高(tmRNA=8.249,t蛋白=14.890，均P=0.000),Beclin-1蛋白表达水平升高(t=7.114,P=0.000)；与MG组比较，BYHW、3-MA组的LC3 mRNA和蛋白表达水平均降低(BYHW:tmRNA=-9.298,t蛋白=-11.727，均P=0.000。3-MA:tmRNA=-3.718,P=0.006;t蛋白=-7.511,P=0.000),BYHW组的Beclin-1蛋白表达水平下降(t=-4.115,P=0.003)；与BYHW组比较，3-MA组HRCECs的Beclin-1蛋白表达水平升高(t=-2.448,P=0.038)，差异均有统计学意义。结论 BYHW延缓非增殖期糖尿病视网膜病的发展可能与其调控HRCECs自噬减少血管形成和迁移有关。

• 单位
  福建中医药大学