逆转录病毒载体介导的T7RNA聚合酶在猪源细胞PK15及SK6中的稳定表达

作者：吴锦艳; 田宏; 郑海学; 陈妍; 靳野; 尚佑军; 刘湘涛

来源：畜牧兽医学报, 2011, (04): 527-532.

• T7RNA聚合酶基因
• 逆转录病毒载体
• PK15细胞
• SK6细胞
• 稳定表达 T7 RNA polymerase gene
• retroviral vector
• PK15 cell
• SK6 cell
• stable expression

本研究旨在利用逆转录病毒载体系统将T7RNA聚合酶基因导入猪源细胞,并对该基因的遗传稳定性进行分析。作者克隆并构建含T7RNA聚合酶基因的逆转录病毒重组载体pBABEpuro/T7。将pBABEpuro/T7与水泡性口炎病毒载体pVSV-G共转染GP2-293细胞,收获重组病毒并用该病毒在Polybrene的介导下分别感染PK15和SK6细胞,用嘌呤霉素筛选阳性细胞克隆。对此阳性细胞进行传代,并对不同代次细胞中的T7RNA聚合酶基因进行扩增,确定其遗传稳定性。用直接荧光法和聚丙烯酰胺凝胶电泳检测细胞中T7RNA聚合酶基因的表达及其活性。结果表明T7RNA聚合酶能够被稳定地整合进靶细胞基因组内,...

• 单位
  中国农业科学院兰州兽医研究所; 农业部; 家畜疫病病原生物学国家重点实验室