肝再生磷酸酶-1稳定转染肝癌细胞株的建立及其生物学功能

作者：金少文; 王开美; 徐康; 徐鋆耀; 褚忠华; 王捷

来源：中华实验外科杂志, 2015, 32(02): 302-305.

DOI：10.3760/cma.j.issn.1001-9030.2015.02.030

• 肝细胞癌
• 肝再生磷酸酶-1
• 反转录病毒载体
• 生物学功能

目的构建肝再生磷酸酶-1(PRL-1)真核表达载体,建立稳定过表达PRL-1的肝细胞癌Huh7细胞株,研究PRL-1在Huh7细胞中的生物学功能。方法应用反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)技术从人肝癌组织总RNA中扩增PRL-1基因编码区域(CDS)全长序列,与双酶切的pMSCV-PIG质粒连接,经PCR及测序鉴定pMSCV-血细胞凝集素(HA)-PRL-1载体构建成功。用293T细胞包装病毒,并感染Huh7细胞,1mg/L嘌呤霉素持续加压筛选2周后,荧光显微镜、流式细胞仪、实时荧光定量聚合酶链反应(FQ-PCR)及Western blot检测PRL-1在Huh7中的表达。PRL-1稳定转染细胞株构建成功后,用细胞计数试剂盒(CCK-8)法进行细胞增殖实验、平板克隆形成实验和Transwell侵袭实验研究PRL-1在Huh7细胞中的生物学功能。结果测序结果显示克隆的PRL-1基因CDS序列完全正确,且正确插入到pMSCV-PIG载体中,荧光显微镜及流式细胞仪检测结果显示细胞稳定转染效率在90%以上,FQ-PCR结果显示PRL-1稳定转染组其mRNA表达是对照组的(4.4±1.5)倍(P<0.05),Western blot结果显示PRL-1在Huh7细胞中过表达。CCK-8细胞增殖实验结果显示PRL-1促进Huh7细胞增殖(P<0.01)。PRL-1稳定转染细胞2周克隆形成率为(26.7±1.9)%,明显高于对照组[(7.3±0.8)%,P<0.01]。PRL-1稳定转染组较对照组侵袭细胞数量增多(P<0.01)。结论 PRL-1肝细胞癌Huh7稳定转染细胞株构建成功,PRL-1促进Huh7细胞增殖、克隆形成及侵袭。

• 单位
  中山大学孙逸仙纪念医院