大鼠GCLC基因两个相邻E-box元件功能分析

作者：洪玮; 付欣; 赖宁; 杨玲; 冉丕鑫; 李冰

来源：中华生物医学工程杂志, 2008, 14(01): 63-67.

DOI：10.3760/cma.j.issn.1674-1927.2008.01.018

• γ-谷氨酰半胱氨酸合成酶
• 氧化剂
• 抗氧化剂
• E-box元件
• 肺疾病,慢性阻塞性

目的研究GCLC基因上游两个相邻E-box元件的作用及探讨E-box元件组合的基因转录抑制机制。方法利用PCR定点缺失法构建单缺失E-box元件(-804～-799)以及双缺失E-box元件(-804～-799、-729～-724)含GCLC上游启动子序列的报告基因载体。将所构建的载体在脂质体介导下瞬时转染大鼠支气管上皮细胞(RTE)、大鼠肺泡上皮细胞(CCL-149),通过比较转染后细胞的荧光素酶活性分析E-box元件对GCLC基因转录活性的影响。结果成功构建出定点缺失E-box元件的GCLC-Luc。在大鼠支气管上皮细胞和大鼠肺泡上皮细胞(CCL-149),转染GCLC-delhE-box-Luc组与GCLC-DdelE-box-Luc组荧光素酶值较转染GCLC-Luc组均明显升高(P均<0.01),均与转染GCLC-delE-box-Luc组荧光素酶值水平大致相同。E-box元件(-804～-799,CACATG)在GCLC基因的基础状态下的转录表达中起抑制作用。结论两个E-box元件可能以转录因子及元件复合物形式抑制GCLC基因的转录调控。

• 单位
  呼吸疾病国家重点实验室; 广州医学院; 广州医学院第一附属医院广州呼吸疾病研究所