杜氏盐藻环盒子1相互作用蛋白的酵母双杂交法筛选

作者：许尧; 张楠楠; 张彦婷; 李庆华; 杨露; 朱相展; 薛乐勋; 关方霞

来源：郑州大学学报(医学版), 2015, 50(03): 326-331.

DOI：10.13705/j.issn.1671-6825.2015.03.005

• 酵母双杂交
• 杜氏盐藻
• 诱饵载体
• 自激活
• 环盒子1

目的:构建杜氏盐藻环盒子1(RBX1)的酵母双杂交诱饵载体p GBKT7-RBX1,筛选与RBX1相互作用的蛋白。方法:采用PCR技术扩增杜氏盐藻RBX1的开放阅读框,测序分析后插入酵母表达质粒,构建诱饵载体p GBKT7-RBX1。将酶切鉴定正确的诱饵载体用PEG/Li Ac法分别转化到酵母菌Y187和AH109中,通过表型筛选检测RBX1对酵母菌有无自激活和毒性作用。转化诱饵质粒的Y187与文库菌AH109杂交,待三叶草形状的合子形成后用营养缺陷型培养基和α-半乳糖苷酶活性实验筛选阳性克隆并测序。结果:成功构建了p GBKT7-RBX1,它对Y187和AH109两种酵母菌既无自激活又无毒性作用。杂交后筛选得到两个阳性克隆,阳性克隆1与莱茵衣藻和拟南芥中氧化还原酶铁硫蛋白亚基的同源性为38%和39%,阳性克隆2与莱茵衣藻中转化抑制剂蛋白的同源性为57%。结论:诱饵载体p GBKT7-RBX1可用于酵母双杂交。成功筛选得到两个阳性克隆,可能是与RBX1相互作用的蛋白。

• 单位
  郑州大学; 生命科学学院; 郑州大学第一附属医院