血橙果肉MYB转录因子的克隆与表达分析

作者：夏荣娜; 李凛; 杨鑫; 王建辉^*

来源：农业生物技术学报, 2020, 28(07): 1211-1220.

• 血橙
• 花青苷
• CsMYB
• 原核表达
• 蛋白免疫印迹

花青苷是一种高活性的黄酮多酚类化合物,广泛存在于各种植物中。MYB转录因子调控植物体内花青苷生物合成。本研究从血橙(Citrus sinensis)果肉中克隆了MYB转录因子,并进行生物信息学分析及基因表达研究;同时,构建原核表达载体PET28-CsMYB,所获得重组蛋白经新西兰大白兔(Oryctolagus cuniculus)免疫制备多克隆抗体,进而使用Western blot技术分别检测了不同样本之间MYB的差异表达。研究结果表明,血橙MYB型转录因子的核酸全长表达序列为789 bp,编码262个氨基酸,编码蛋白的1～56位与57～111位氨基酸分别具有MYB保守结构域R2和R3,将其命名为CsMYB (GenBank No. KT757348)。将不同植物来源的MYB氨基酸全长序列进行多重比对分析并构建系统进化树,结果表明,CsMYB编码蛋白与已报道的荔枝(Litchi chinensis)花青苷调控蛋白(LcMYB1)聚在同一个进化支上,两个蛋白的氨基酸序列同一性为56.1%。对血橙不同组织进行基因差异表达分析,结果显示,CsMYB在果肉组织中高表达;同时参与花青苷生物合成与运输途径的查尔酮合成酶基因(chalcone synthase, CHS)与谷胱甘肽巯基转移酶基因(glutathione S-transferase, GST)在果肉中也呈现高表达;CsMYB基因表达随着果实发育与成熟而逐渐升高;与低花青苷含量的血橙芽变突变体比较,正常花青苷积累的果肉组织中CsMYB基因表达更高,并且CHS表达变化趋势与CsMYB一致。Western blot结果表明,只在血橙果肉样本中有36 kD的MYB蛋白杂交条带。综上所述,CsMYB可能参与调控血橙果肉花青苷的生物合成,本研究可为血橙果实着色机制研究与遗传育种提供参考依据。

• 单位
  成都理工大学; 四川省农业科学院园艺研究所