5-Aza-dC对硫酸铍诱导A549细胞中TβR Ⅱ DNA甲基化的作用

作者：刘科良; 孙林清; 王耀峰; 李思睿; 徐海明^*; 刘志宏^*

来源：毒理学杂志, 2022, 36(06): 485-489.

DOI：10.16421/j.cnki.1002-3127.2022.06.005

• 转化生长因子-βⅡ型受体
• DNA甲基化
• 5-Aza-dC

目的 探讨5-氮杂-2’-脱氧胞苷(5-Aza-2’-deoxycytidine, 5-Aza-dC)对BeSO4诱导人肺腺癌A549细胞中转化生长因子-βⅡ型受体(TβRⅡ)DNA甲基化的作用。方法 建立BeSO4染毒的A549细胞培养实验模型，采用CCK-8法检测细胞增殖活性，荧光定量聚合酶链反应(Quantitative Real-time PCR)检测TβRⅡ、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、胶原蛋白Ⅲ(COL-Ⅲ)和胶原蛋白Ⅰ(COL-Ⅰ)的mRNA表达；用5-Aza-dC进行干预，采用巢式降落式甲基化特异性PCR法检测TβRⅡDNA甲基化水平，用蛋白质印迹法(Western blot)检测TβRⅡ蛋白相对表达水平。结果 根据细胞增殖结果建立低、中、高剂量组(终浓度分别为1、10和100μmol/L);BeSO4可以诱导细胞形态变化，从椭圆形紧密连接的上皮细胞到纺锤形松散连接的间质细胞，并且随着暴露时间的延长，形态变化更加明显，BeSO4在不同时间内诱导的细胞存活率随暴露时间延长而降低，最终选用细胞存活相对较多且低、中、高剂量组差异均有统计学意义的48 h作为干预时间；PCR结果显示：与对照组相比，BeSO4各剂量组α-SMA、COL-Ⅲ和COL-Ⅰ的mRNA表达水平升高，这提示A549细胞胶原过量形成；与对照组相比，BeSO4中、高剂量组的TβRⅡDNA甲基化水平分别增加77.52%和96.71%(P<0.05),5-Aza-dC干预组TβRⅡDNA甲基化水平较中剂量组降低28.60%(P<0.05);与对照组相比，BeSO4低、中剂量组TβRⅡmRNA表达水平升高，中、高剂量组TβRⅡ蛋白相对表达水平分别升高117.49%、203.08%(P<0.05);5-Aza-dC干预后，TβRⅡ蛋白的表达水平较中剂量组降低15.22%,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 5-Aza-dC干预可导致BeSO4诱导的A549细胞TβRⅡDNA甲基化程度降低。

• 单位
  新乡医学院三全学院; 宁夏医科大学