假单胞菌M18中藤黄绿菌素合成限速酶基因的鉴定及表达优化

作者：李赛男; 李慷; 王姝芸; 王国昊; 黄显清; 许煜泉

来源：微生物学通报, 2012, (03): 300-308.

DOI：10.13344/j.microbiol.china.2012.03.012

• 假单胞菌株
• 藤黄绿菌素
• 限速酶
• IPTG诱导条件优化 Pseudomonas sp.M18
• Pyoluteorin
• Rate-limiting enzyme
• Conditional optimization of IPTG induction

【目的】假单胞菌株M18中负责抗真菌剂藤黄绿菌素(Plt)合成的结构基因包括pltLABCDEFG、pltM。为了鉴定Plt合成限速酶的基因,分别将9个结构基因过表达。【方法】以M18菌株染色体DNA为模板,PCR扩增这9个Plt合成基因的编码区,分别克隆到穿梭载体pME6032的tac启动子下游,构建9个结构基因的过表达载体,并转入假单胞菌株M18中。在KMB培养基中进行Plt发酵分析。【结果】分别携带pltC、pltD、pltF过表达载体的菌株与携带空质粒的菌株相比,Plt产量分别提高了96%、78%、75%。对重组菌株进行IPTG诱导浓度和诱导时间的优化,确定IPTG最佳诱导浓度为1.0...

• 单位
  微生物代谢国家重点实验室; 上海交通大学; 生命科学技术学院