基于λ Red重组系统敲除鼠伤寒沙门菌yejE基因

作者：李瑞; 肖金雨; 娄莉萍; 唐田^*

来源：现代预防医学, 2020, 47(17): 3207-3211.

• 沙门菌
• 同源重组
• 菌株构建
• yejE基因

目的采用改良的λRed同源重组技术,以减毒沙门菌TT-16(ΔclpP TT-1)为前体菌,构建敲除yejE基因的减毒沙门菌TT-54(ΔclpPΔyejE TT-1),为后续研究yejE基因的功能奠定基础。方法 (1)将重组质粒PKD46导入减毒沙门菌TT-16(ΔclpP TT-1),获得一次重组受体菌TT-51(ΔclpP PKD46 TT-1);(2)通过PCR扩增获得yejE基因的一次同源重组打靶片段,将其导入TT-51(ΔclpP PKD46 TT-1),利用四环素平板筛选,获得重组菌TT-52(ΔclpPΔyejE::tetRA TT-1);(3)将重组质粒PKD46导入重组菌TT-52,获得同源重组受体菌TT-53(ΔclpPΔyejE::tetRA PKD46 TT-1);(4)将PCR扩增获得的yejE基因二次同源重组打靶片段导入TT-53(ΔclpPΔyejE::tetRA PKD46 TT-1),通过四环素敏感平板筛选,获得敲除了yejE基因的减毒沙门菌TT-54(ΔclpPΔyejE TT-1)。结果通过两轮(一次和二次)λRed同源重组,减毒沙门菌TT-16(ΔclpP TT-1)的yejE基因被成功敲除,PCR及测序鉴定结果符合预期。结论基于模式菌(大肠杆菌)所构建的λRed同源重组技术完全适用于沙门菌;通过两轮λRed同源重组,可实现对沙门菌特定靶基因的无痕敲除。

• 单位
  四川大学; 公共卫生学院