三七中黄酮糖基转移酶的筛选与鉴定

作者：聂锋; 侯茂奇; 赵嘉宁; 王如锋; 赵淑娟^*

来源：上海中医药大学学报, 2021, 35(06): 73-81.

DOI：10.16306/j.1008-861x.2021.06.011

• 三七
• 黄酮
• 糖基转移酶
• 重组蛋白
• 催化功能

目的:将前期克隆得到21条三七来源的糖基转移酶基因,构建到pCold表达载体,以实现重组蛋白的可溶性表达,并筛选、鉴定其在体外对黄酮类化合物的催化功能。方法:对21条糖基转移酶基因进行系统进化树分析;利用同源重组的方法将其克隆到pCold表达载体上,并在大肠杆菌中表达重组蛋白。低温诱导重组蛋白表达,以黄酮类化合物为糖基受体底物,UDP-葡萄糖为糖基供体,采用高效液相色谱法(HPLC)检测酶促反应产物。结果:分别以山柰酚和芹菜素为底物,重组蛋白PnUGT82参与反应后,可检测到山柰酚7-O葡萄糖苷和芹菜素7-O葡萄糖苷,而阴性对照组未检测到对应的糖苷产物。结论:筛选得到1条三七来源的糖基转移酶PnUGT82,能够催化黄酮类化合物,在体外将UDP-葡萄糖上的葡萄糖基团转移到山柰酚或芹菜素7位羟基,形成相应的黄酮7-O糖苷化产物。

• 单位
  上海中医药大学; 国家中医药管理局