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摘要
目的探讨一种新型的大量粪便肠黏膜提取方法在结直肠癌筛查中的应用。方法收集2014年3—4月间,于南京中医药大学第三附属医院拟行手术治疗的10例结直肠癌患者术前1次完整粪便标本和手术切除癌组织标本。同时收集6例肠镜检查未见异常的6例同期住院患者的肠黏膜组织及1次完整粪便标本。使用自制的肠黏膜收集器(该肠黏膜收集器由上、中、下3个体积为1 000 ml容器组成,3层底部均分别有层滤网,孔径分别为100、200及300目,逐层过滤后收集液体)肠黏膜脱落细胞,采用粪便DNA试剂盒提取脱落细胞DNA,检测DNA浓度及纯度(A260/A280),并对提取的粪液以及肠黏膜组织进行甲基化测序。结果 DNA甲基化测序发现,FBN1、SPG20及SNCA基因在10例结直肠癌患者的癌组织和粪便提取液标本中CpG岛均出现甲基化,而在6例对照患者的活检肠黏膜和粪便提取液标本中均未发现甲基化。粪便重量在100 g以下时,粪液收集率在60%80%之间;粪便重量超过100 g后,粪液收集率不稳定;粪便重量在50100 g之间时,DNA的A260/A280值在1.61.8之间,浓度在5.056.1μg/ml之间。结论本研究采用自行设计的大量粪便肠黏膜收集器一次性处理50100 g粪便时,粪液收集率较为稳定,可获取纯度和浓度较高的DNA,达到检测结直肠肿瘤甲基化状态的需要,便于结直肠癌的筛查。
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