IgG1型单克隆抗体对照品的一级结构解析

作者：崔新玲; 胡志上; 孟晓光; 钱小红; 朱涛; 应万涛^*

来源：分析测试学报, 2019, 38(08): 939-945.

• 抗体对照品
• 分子量
• 等电点
• 电荷异质性
• 肽图

对单克隆抗体药物对照品(IgG1型)进行了全面的结构表征。采用Exactive plus EMR质谱测定了去N糖前后抗体的精确分子量,并通过计算N糖含量得出其完整分子量为148 285.0～149 020.8,完整去糖后分子量为145 810.4,N糖含量为1.67%～2.15%。优化了全柱成像实时等电聚焦毛细管电泳(WCID-cIEF)检测方法,结果显示该抗体等电点分布在8.21～8.74之间,其中主成分等电点为8.61,相对含量为61.43%。继而使用离子交换色谱检测了电荷异质性,发现碱性峰含量为4.1%,酸性峰含量为23.9%,主峰含量为72.0%,与WCID-cIEF结果吻合,并证明了方法间良好的重现性。通过切糖前后的肽图分析,获得糖肽分布信息,识别出糖修饰位点及重轻链的互补决定区(CDR),甲硫氨酸(M)的氧化位点及氧化率,并通过抗体还原前后的肽图解析出二硫键连接。研究结果同时提示该抗体对照品无C末端糖化修饰现象。

• 单位
  生物工程学院; 中国计量科学研究院; 蛋白质组学国家重点实验室; 天津科技大学; 北京蛋白质组研究中心