新疆出血热病毒实时荧光RT-PCR检测方法的假病毒阳性对照品制备

作者：郑夔; 袁帅; 黎东红; 丁国允; 李小波; 师永霞; 戴俊; 黄吉城

来源：华南预防医学, 2016, (01): 1-5.

DOI：10.13217/j.scjpm.2016.0001

• 新疆出血热病毒
• 实时荧光RT-PCR
• 阳性对照品 Xinjiang hemorrhagic fever virus
• Real-time RT-PCR
• Positive control

目的制备安全、稳定的新疆出血热病毒实时荧光RT-PCR检测阳性对照品。方法人工合成含实时荧光RT-PCR扩增片段的新疆出血热病毒核苷酸序列,连接入慢病毒载体,将重组慢病毒载体与慢病毒包装载体共转染293T细胞,培养48 h后采用实时荧光RT-PCR方法检测假病毒包装情况,随后将包装成功的假病毒颗粒加核酸保护剂制备成阳性对照品,并进行稳定性试验。结果重组慢病毒载体与慢病毒包装载体共转染293T细胞后,将收集到的细胞培养上清采用实时荧光RT-PCR进行检测,结果显示10、100、1 000、10 000倍4个倍比稀释度扩增后所得的Ct值分别为13、19、25、33,显示含高浓度的假病毒颗粒。取经1...

• 单位
  广东出入境检验检疫局检验检疫技术中心