不同信号肽对嵌合抗原受体T细胞杀伤作用的影响研究

作者：李帆; 张琴星; 童祥文; 田高辉; 顾力行; 徐瑶

来源：中国癌症杂志, 2022, 32(02): 142-151.

DOI：10.19401/j.cnki.1007-3639.2022.02.006

• 信号肽
• 嵌合抗原受体
• 靶向CD19的嵌合抗原受体(chimeric antigen receptor
• CAR)T细胞
• 体外杀瘤
• 细胞因子

背景与目的：信号肽（signal peptide,SP）是一段存在于前体蛋白N-端的短肽链，能够调节前体蛋白的折叠和转移，在蛋白质的分泌过程中扮演着极其重要的角色。近年来，靶向CD19的嵌合抗原受体（chimeric antigen receptor,CAR）T细胞在白血病治疗中取得了重大突破，关于CAR结构的胞内域改造方面也有诸多研究，而对单链可变片段（scFv）的N端SP研究进展缓慢。探讨4种不同SP的CD19-CAR在T细胞表面表达及对CD19+靶细胞的杀伤作用。方法：通过基因合成和分子克隆技术，构建含4种不同SP(SP1、SP2、SP3、SP4)的靶向CD19抗原的CAR载体，进行慢病毒包装，将得到的慢病毒转染T细胞，利用流式细胞术检测细胞转染效率，采用钙黄绿素释放法检测该细胞对靶细胞的杀伤作用，采用酶联免疫吸附实验（enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA）检测细胞因子IFN-γ和TNF-α的分泌水平。结果：成功构建4种不同SP的重组慢病毒载体，将4种慢病毒转导T细胞后，结果显示，分别有20.9%、22.6%、31.5%、38.6%的T细胞表面能够表达CD19-CAR（分别命名为SP1-CD19、SP2-CD19、SP3-CD19和SP4-CD19细胞），进一步杀瘤实验证明，SP4-CD19细胞对CD19+肿瘤细胞的杀伤作用显著高于SP1-CD19、SP2-CD19和SP3-CD19细胞（P0.05）。结论：SP4-CD19细胞的转染效率、细胞因子分泌水平及对CD19+肿瘤细胞的杀伤作用均显著高于SP1-CD19、SP2-CD19和SP3-CD19细胞，该研究成果为CAR-T优化改造及其高效的临床应用奠定了科学基础。

• 单位
  武汉科技大学