兔出血症病毒感染性克隆的优化

作者：杨宗伟; 张伟伟; 陈宗艳; 李传峰; 吴润; 刘光清

来源：甘肃农业大学学报, 2011, (03): 8-12.

DOI：10.13432/j.cnki.jgsau.2011.03.001

• 兔出血症病毒
• 病毒拯救
• 全长cDNA rabbit hemorrhagic disease virus
• virus rescued
• full length cDNA.

为避免细胞外转录步骤,使RHDV感染性克隆的转录和病毒拯救过程一步化,试验通过PCR反应在RHDV cDNA序列的5′端添加T7启动子核心序列,3′端添加具有自身切割功能的核酶核心序列.然后,将RHDV基因组的不同cDNA片段装配到pTVT转录载体中,构建了含有RHDV全长cDNA序列的重组质粒pTVT-RHDV.在转染能稳定表达T7RNA聚合酶的BHK细胞后,将收获的细胞培养物感染MA104细胞.分别用逆转录PCR、间接免疫荧光检测以及一步生长曲线等方法对拯救病毒进行了鉴定.结果表明,试验成功拯救出了RHDV,优化了RHDV感染性克隆的构建过程.

• 单位
  兽医生物技术国家重点实验室; 中国农业科学院上海兽医研究所; 浙江师范大学; 甘肃农业大学