黔北麻羊HSD3B1基因真核表达载体构建及其对卵巢颗粒细胞的影响

作者：洪磊; 陈祥^*; 敖叶; 周志楠; 唐文; 韦仕南

来源：农业生物技术学报, 2020, 28(09): 1604-1613.

• 黔北麻羊
• 3β-羟基类固醇脱氢酶-1 (HSD3B1)
• T-克隆
• 生物信息学分析
• 真核载体构建

3β-羟基类固醇脱氢酶-1 (3β-hydroxysteroid dehydrogenase 1, HSD3B1)是类固醇激素家族中的关键成员之一,与动物的繁殖性状密切相关。为了克隆黔北麻羊(Capra hircus) HSD3B1基因,构建真核表达载体,探究其对产羔性状相关基因在卵巢颗粒细胞表达的影响,本研究采集黔北麻羊卵巢组织进行卵巢颗粒细胞培养并提取组织中的总RNA,反转录为cDNA,克隆黔北麻羊HSD3B1基因(GenBank No.NM001135932.1) CDS区全长序列,并进行生物信息学分析;同时将构建的HSD3B1基因真核表达载体,转染至卵巢颗粒细胞,qRT-PCR检测HSD3B1、山羊产羔性状相关的骨形成蛋白15基因(bone morphogenetic protein 15, BMP15)、生长分化因子9基因(growth differentiation factor 9, GDF9)、骨形态发生蛋白受体1B基因(bone morphogenetic protein receptor type 1B, BMPR-1B)的mRNA表达水平。结果发现:T-克隆的黔北麻羊HSD3B1基因CDS区为1 122 bp,编码373个氨基酸,与NCBI上登录的绵羊(Ovis aries)的mRNA序列相同;蛋白预测结果显示:黔北麻羊HSD3B1蛋白的分子式为C1940H3002N506O543S15,相对分子质量为42.583 14 kD;等电点为7.96;遗传进化树分析得出,黔北麻羊HSD3B1基因与牛(Bos taurus)的遗传距离最近;qRT-PCR结果显示,转染实验组HSD3B1表达量极显著高于空白组(P<0.01),产羔性状相关的GDF9基因表达量极显著高于空白对照组(P<0.01),BMP15基因的表达量显著高于空白对照组(P<0.05),表明HSD3B1基因的超表达可以促进产羔相关的GDF9基因和BMP15基因在卵巢颗粒细胞的表达。本研究成功构建pEGFP-N3-HSD3B1真核表达载体,检测HSD3B1基因对黔北麻羊产羔性状相关基因的表达影响,为进一步研究HSD3B1基因对黔北麻羊产羔性状的影响提供基础资料。

• 单位
  贵州大学; 动物科学学院