幽门螺杆菌及其毒力因子空泡细胞毒素A对人胃腺癌细胞DNA同源重组修复和细胞周期的影响

作者：莫慧; 黄煌^*; 梅璐; 米阳; 刘斌; 白利梅; 于泳

来源：肿瘤基础与临床, 2023, 36(01): 7-13.

• 幽门螺杆菌
• 同源重组修复
• 胃腺癌
• 空泡细胞毒素A

目的 研究幽门螺杆菌(Hp)标准株Hp P12和其毒力因子空泡细胞毒素A(VacA)对人胃腺癌细胞DNA损伤、同源重组修复和细胞周期的影响。方法 取对数生长期的人胃腺癌AGS细胞，应用Hp标准株(Hp P12)和其VacA基因敲除株(Hp P12ΔVacA)以感染复数(multiplicity of infection, MOI)100分别感染AGS细胞，使用Western Blot方法检测DNA损伤标记蛋白γH2AX、HR修复关键蛋白(Rad51、CtIP、pCtIP)、细胞周期检测点激酶2(pCHK2)的表达水平，进一步用流式细胞术检测细胞周期，验证Hp P12及其毒力因子VacA对HR修复和细胞周期的影响。结果 DNA损伤标记蛋白γH2AX的表达，在Hp P12感染组较未感染组上调(6 h:t=4.870,P=0.001;12 h:t=4.118,P=0.003),在Hp P12ΔVacA感染组较Hp P12感染组下调(6 h:t=4.669,P=0.002;12 h:t=3.117,P=0.013)。Rad51、CtIP、pCtIP和pCHK2的表达在Hp P12感染12 h组较未感染组下调(Rad51:t=22.740,P<0.001;CtIP:t=31.970,P<0.001;pCtIP:t=3.777,P=0.020;pCHK2:t=10.740,P<0.001),而Rad51、pCHK2的表达在Hp P12ΔVacA感染12 h组均较Hp P12感染12 h组上调(Rad51:t=5.637,P=0.005;pCHK2:t=3.726,P=0.006)CtIP的表达在Hp P12ΔVacA感染6 h组较Hp P12感染6 h组上调(t=4.580,P=0.002)。进一步采用流式细胞术检测细胞周期发现Hp P12感染组G1期细胞数较未感染组下调(t=11.530,P<0.001),S期细胞数上调(t=8.583,P=0.001)。而Hp P12ΔVacA感染组G1期细胞数较Hp P12感染组上调(t=5.781,P=0.004),S期细胞数下调(t=5.481,P=0.005)。结论 Hp P12标准株感染人胃腺癌细胞后引起DNA损伤，抑制了细胞HR修复，并引起细胞周期阻滞，其中VacA毒力因子起到了重要作用。

• 单位
  郑州大学; 郑州大学第五附属医院