氰戊菊酯过度激活Ca2+/CaM/CaMKⅡ信号通路诱发线粒体损伤干扰TM3细胞睾酮合成

作者：姚金玲; 李廷兵; 胡静; 万小榆; 孔德营

来源：遵义医科大学学报, 2023, 46(11): 1032-1040.

DOI：10.14169/j.cnki.zunyixuebao.2023.0151

• 氰戊菊酯
• TM3细胞
• 睾酮
• 2+/CaM/CaMKⅡ信号通路" name="keyword">Ca2+/CaM/CaMKⅡ信号通路
• mPTP开放

目的 利用胞内Ca2+螯合剂BAPTA-AM和CaM阻断剂TFP探讨Ca2+/CaM/CaMKⅡ信号通路在氰戊菊酯(Fen)诱发小鼠睾丸间质细胞(TM3细胞)线粒体损伤和睾酮合成障碍中的作用。方法 TM3细胞实验分为对照组、Fen暴露组(25μmol/L Fen)、Fen+BAPTA-AM组(25μmol/L Fen+5 mmol/L BAPTA-AM)、Fen+TFP组(25μmol/L Fen+10μmol/L TFP),Fen暴露时长为24 h。采用ELISA法检测TM3细胞的睾酮和环磷酸腺苷(cAMP)水平，化学比色法检测TM3细胞的ATP水平，Flou-4/AM探针测定细胞内Ca2+水平，JC-1染色法测定TM3细胞的线粒体膜电位(MMP)改变，蛋白免疫印迹法检测CYP11A1、3β-HSD、StAR、CaM、p-CaMKⅡ、CaMKⅡ、Bax和Bcl-2的蛋白表达水平。结果 Fen暴露组TM3细胞的T、ATP和cAMP含量下降，MMP水平降低，睾酮合成的相关蛋白和酶CYP11A1、3β-HSD、StAR表达减少(P<0.01);同时，TM3细胞胞内的Ca2+水平显著上升(P<0.01),CaM、p-CaMKⅡ/CaMKⅡ、Bax蛋白表达升高(P<0.01),Bcl-2蛋白表达下降(P<0.01)。Fen+BAPTA-AM组和Fen+TFP组TM3细胞的睾酮、ATP和cAMP含量上升，MMP水平升高(P<0.01),睾酮合成相关的蛋白和酶CYP11A1、3β-HSD、StAR表达增加(P<0.01),CaM、p-CaMKⅡ/CaMKⅡ及Bax蛋白表达下降，Bcl-2蛋白表达增加(P<0.01)。结论 Fen诱发的TM3细胞mPTP开放以及睾酮合成障碍可能与Fen暴露后TM3细胞胞内Ca2+超载、CaM和p-CaMKⅡ表达上调引起的Ca2+/CaM/CaMKⅡ信号通路过度激活有关。

• 单位
  基础医学院; 遵义医科大学