醛酮还原酶AKR7A5蛋白的纯化及其对萘醌类化合物的底物特异性研究

作者：李丹; 刘雅茹; 张岐山; 初阳

来源：细胞与分子免疫学杂志, 2012, 28(08): 825-827.

DOI：10.13423/j.cnki.cjcmi.006536

• 醛酮还原酶
• 萘醌类化合物
• 蛋白纯化
• 底物特异性

目的:探讨小鼠醛酮还原酶AKR7A5蛋白对萘醌及其衍生物的底物特异性。方法:IPTG(异丙基硫代半乳糖糖苷)诱导BL21pLysS大肠杆菌中His标签的AKR7A5融合蛋白大量表达,利用FPLC系统通过HiTrap亲和柱纯化His-AKR7A5融合蛋白,经SDS-PAGE和Western blot法鉴定纯化的AKR7A5蛋白。使用AKR酶活性实验检测纯化的重组AKR7A5蛋白对萘醌类化合物的底物特异性。结果:经SDS-PAGE和Western blot验证,成功纯化了His标签的AKR7A5融合蛋白;AKR酶活性实验结果显示,重组AKR7A5蛋白对散沫花醌有中等亲和力,对胡桃醌和维生素K3有较低的亲和力,对1,4-萘醌无亲和力。结论:成功纯化了重组AKR7A5蛋白,并检测了其对萘醌类化合物的底物特异性,结果表明醛酮还原酶很可能选择性地参与萘醌类化合物的代谢。

• 单位
  中国医科大学附属第一医院; 中国医科大学