小鼠内皮抑制素真核质粒的构建表达及其体外活性

作者：黎培员; 林菊生; 冯作化; 贺宇飞; 周鹤俊; 田德安

来源：华中科技大学学报(医学版), 2007, (02): 179-182.

DOI：10.3870/j.issn.1672-0741.2007.02.011

• 内皮抑制素
• Igκ信号肽
• 重组质粒
• 基因表达
• 内皮细胞

目的构建小鼠内皮抑制素(endostatin)真核表达质粒,进行分泌性表达,研究其体外生物学活性,以进一步用于肿瘤的基因治疗。方法人工合成小鼠Igκ轻链信号肽序列,RT-PCR获得小鼠内皮抑制素编码序列,一起克隆入真核表达载体pcDNA3.1中,对其进行酶切鉴定和序列分析。重组质粒经脂质体介导转染受体细胞BHK-21,ELISA检测细胞培养上清中内皮抑制素的含量。用此上清作用于经bFGF刺激的ECV304内皮细胞和HepG2肝癌细胞,MTT法检测细胞的增殖。结果经酶切鉴定及DNA测序分析,Igκ信号肽序列及内皮抑制素编码序列成功克隆到目的位点上,其转染细胞上清中可以检测到分泌出的内皮抑制素,含量为(65.5±10.9)ng/106细胞;并且可以抑制ECV304内皮细胞的增殖,抑制率约为29.2%,而对HepG2肝癌细胞增殖没有影响。结论成功构建了小鼠内皮抑制素真核质粒,其分泌性表达产物可以抑制内皮细胞的增殖,具有较好的生物学活性。

• 单位
  基础医学院; 华中科技大学同济医学院; 华中科技大学同济医学院附属同济医院