RNAi抑制IEC-6细胞中ERp29表达

作者：杨媛; 章波; 王蒙; 王军平; 粟永萍

来源：第三军医大学学报, 2006, (11): 1135-1137.

DOI：10.16016/j.1000-5404.2006.11.002

• ERp29
• RNAi
• IEC-6
• 转染
• 表达 ERp29
• IEC-6 cells
• transfection
• expression

目的构建抑制大鼠ERp29基因表达的重组质粒,并在IEC-6细胞中发挥作用。方法根据大鼠ERp29的基因序列,设计合成含有发夹结构的寡核苷酸片段,经退火形成双链后克隆至pAVU6+27载体质粒中,对阳性重组子进行酶切和测序鉴定后转染正常IEC-6细胞,通过PCR方法对siERp29干扰片段进行鉴定,并采用W estern b lot检测ERp29蛋白水平的表达变化。结果重组质粒经双酶切后,有目的条带出现,提示ERp29干扰片段已克隆至pAVU6+27载体质粒中,DNA测序结果显示插入序列与预先设计完全一致。重组质粒转染IEC-6细胞后经G418筛选,成功获得阳性克隆,W estern b lo...

• 单位
  创伤、烧伤与复合伤研究国家重点实验室; 第三军医大学