基于VN210/VC210的双分子荧光互补定量分析cofilin-actin相互作用的特异性

作者：王小毅; 马晓骊; 陈虹; 黄秉仁; 陈等^*

来源：现代生物医学进展, 2022, 22(04): 601-605.

DOI：10.13241/j.cnki.pmb.2022.04.001

• 双分子荧光互补
• 定量分析
• cofilin-actin相互作用

目的：利用双分子荧光互补技术定量分析cofilin-actin的特异性相互作用。方法：首先构建表达VN210（编码荧光蛋白Venus 1-210氨基酸）和VC210（编码荧光蛋白Venus 210-238氨基酸）探针的质粒，通过梯度剂量转染检测该探针对的自组装能力；其次构建VN210/VC210与bJun、bFos、Fos△zip、cofilin(WT)、cofilin(S3E)和actin的融合表达载体，在HeLa细胞中分别过表达不同载体组合，以VN210-bJun/bFos-VC210组作为阳性对照，以VN210-bJun/bFos△zip-VC210组作为阴性对照，使用多功能细胞观测显微镜观察并拍摄荧光图像；最后使用多功能微孔板检测仪，对对照组进行波谱扫描，确定最适合检测的激发光波长和发射光波长，再以此选择波长检测实验组中可观察到荧光信号组合的荧光强度，进行统计分析。结果：(1) VN210/VC210在各转染剂量组中均未观察到荧光信号；(2)阳性对照组可观察到荧光信号，阴性对照组未观察到荧光信号；实验组中，VN210-cofilin(WT)/actin-VC210组荧光信号较强，VN210-cofilin(S3E)/actin-VC210和VN210/actin-VC210组荧光信号较弱，其余组均观察不到荧光信号；(3)产生荧光信号的实验组中，VN210-cofilin(S3E)/actin-VC210和VN210/actin-VC210组间的荧光信号无显著差异，但分别与VN210-cofilin(WT)/actin-VC210组具有显著差异。结论：VN210/VC210双分子荧光互补技术可定量检测cofilin-actin的特异性相互作用。

• 单位
  中国医学科学院基础医学研究所; 北京协和医学院