楮实子水提物对二乙基亚硝胺诱发小鼠肝细胞癌的抑制作用及PTEN/PI3K/Akt信号通路的影响

作者：黄梓涵; 孔亮; 严艾文; 宋月雯; 江盼; 季瑜; 闫宇辉^*

来源：中国实验方剂学杂志, 2023, 29(22): 29-36.

DOI：10.13422/j.cnki.syfjx.20231826

• 楮实子
• 肝细胞癌
• 增殖
• 二乙基亚硝胺
• 同源性磷酸酶-张力蛋白/磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B(PTEN/PI3K/Akt)信号通路

目的：基于同源性磷酸酶-张力蛋白(PTEN)/磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)/蛋白激酶B(Akt)信号通路探讨楮实子水提物对二乙基亚硝胺(DEN)诱发小鼠肝细胞癌(HCC)的抑制作用。方法：采用腹腔注射DEN的方法构建原发性HCC小鼠模型，将HCC小鼠随机分为模型组、索拉非尼组(0.01 g·kg-1·d-1)、楮实子水提物低、中、高剂量组(0.9、1.8、3.6 g·kg-1·d-1)，每组10只；另取10只C57BL/6小鼠作为空白组，腹腔注射等体积生理盐水。在小鼠肝脏出现肝癌样白色结节后灌胃给予不同浓度的楮实子水提物；索拉非尼组给予索拉非尼灌胃；空白组和模型组小鼠给予生理盐水灌胃。生化分析仪检测小鼠血清碱性磷酸酶(ALP)、天门冬氨酸氨基转移酶(AST)、丙氨酸氨基转移酶(ALT)及γ-谷氨酰转移酶(γ-GT)活性；酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测肿瘤标志物甲胎蛋白(AFP)、癌胚抗原(CEA)表达水平；苏木素-伊红(HE)染色及马松(Masson)染色观察肝细胞癌变程度及肝细胞损伤情况；免疫组织化学染色观察肝癌细胞增殖情况；脱氧核苷酸末端转移介导的缺口末端标记法(TUNEL)染色观察小鼠肝癌细胞凋亡情况；蛋白免疫印迹法(Western blot)检测PTEN/PI3K/Akt信号通路相关蛋白PTEN、PI3K、磷酸化-Akt(p-Akt)蛋白表达水平变化。结果：与空白组比较，模型组小鼠ALP、AST、ALT、γ-GT活性及AFP、CEA表达水平显著升高(P<0.01)；小鼠肝组织癌变和炎症细胞浸润现象明显，可见大量蓝色胶原纤维增生；肿瘤增殖抗原(Ki67)阳性的增殖细胞数量显著增加(P<0.01);PTEN蛋白表达被抑制(P<0.01)，并促进PI3K、p-Akt蛋白表达(P<0.01)；与模型组比较，楮实子水提物中、高剂量组小鼠血清中ALP、AST、ALT、γ-GT活性及AFP、CEA表达水平明显降低(P<0.05,P<0.01)；且小鼠肝组织癌变程度和炎症细胞浸润明显减轻，胶原纤维增生明显减少；楮实子水提物中、高剂量组Ki67阳性的增殖细胞数量明显减少(P<0.05,P<0.01)，楮实子水提物高剂量组TUNEL阳性的凋亡细胞数量明显增加(P<0.05,P<0.01)；楮实子水提物楮实子水提物中、高剂量组促进PTEN蛋白表达(P<0.05,P<0.01)，抑制p-Akt蛋白表达(P<0.05,P<0.01)。结论：楮实子水提物对DEN诱发的小鼠原发性HCC具有显著的抑制作用，其作用机制可能与调控PTEN/PI3K/Akt信号通路中关键蛋白表达有关。

• 单位
  食品与生物工程学院; 辽宁中医药大学; 江苏食品药品职业技术学院