枸杞籽油对小鼠睾丸支持细胞衰老模型的抗炎作用

作者：杨张杰; 王宇欣; 陈冬梅; 赵帅; 虎娜; 马良宏^*; 马会明^*

来源：山东大学学报(医学版), 2020, 58(12): 15-22.

• 枸杞籽油
• TM4细胞
• 炎症因子
• NF-κB通路

目的探讨枸杞籽油对小鼠睾丸支持细胞(TM4)衰老模型的抗炎作用及机制。方法以不同浓度(50、100、150、200 mmol/L)的D-半乳糖(D-Gal)以不同时间(24、36、48 h)体外作用TM4细胞,通过CCK-8法和β-半乳糖苷酶染色筛选最佳时间浓度的D-Gal建立TM4衰老模型,Western blotting检测衰老因子P16INK4A、P21Waf1/Cip1、γH2A.X以及半乳糖苷酶蛋白的表达。以不同浓度(1%、3%、5%、10%)枸杞籽油含药血清提前干预TM4细胞衰老模型,并用CCK-8筛选枸杞籽油含药血清最佳浓度。Western blotting检测细胞炎症因子白细胞介素-1(IL-1β)、肿瘤坏死因子(TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6)、白细胞介素-10(IL-10)与血红素加氧酶(HO-1)的表达以及p-P65/P65的相对表达量;细胞免疫荧光(IF)定位NF-κB表达。结果 D-Gal建立TM4衰老模型结果显示,与正常细胞比较,200 mmol/L浓度的D-Gal干预48 h对细胞增殖有抑制作用,其抑制率为(14.890±0.892)%,差异有统计学意义(F=12.820,P=0.004;t=17.230,P<0.001),同时β-半乳糖苷酶染色结果显示,与正常细胞比较,细胞蓝染阳性率上升(t=5.243,P<0.001)。P16INK4A(t=2.364,P=0.033)、P21Waf1/Cip1(t=2.908,P=0.011)、γH2A.X(t=2.511,P=0.025)蛋白表达以及半乳糖苷酶(t=2.299,P=0.037)表达在衰老模型组升高。枸杞籽油抗TM4衰老的结果显示,3%浓度的枸杞籽油含药血清干预衰老TM4细胞后活性上升(t=5.399,P<0.001)。与正常细胞比较,TM4细胞衰老相关蛋白P16INK4A(t=7.211,P<0.001)、P21Waf1/Cip1(t=8.248,P<0.001)、γH2A.X(t=4.145,P<0.001)以及半乳糖苷酶(t=7.288,P<0.001)表达下调;与模型组相比,3%浓度的枸杞籽油含药血清干预后炎症因子TNF-α(t=4.992,P<0.001)、IL-1β(t=2.921,P=0.011)、IL-6 (t=4.985,P<0.001)的表达下调,HO-1 (t=6.047,P<0.001)与IL-10 (t=2.315,P=0.036)表达上调;衰老TM4细胞p-P65/P65相对表达量在3%浓度的枸杞籽油含药血清干预后下调(t=24.630,P<0.001)。结论 3%枸杞籽油含药血清干预,对衰老TM4细胞有明显的抗炎作用,其机制可能是下调核因子κB进而抑制下游炎症因子IL-1β、TNF-α、IL-6表达,并启动抑炎因子HO-1、IL-10的表达。

• 单位
  宁夏医科大学; 宁夏医科大学总医院; 基础医学院