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摘要
Gateway 技术是一种通用型克隆方法,其基于λ噬菌体位点特异性重组,将目的 DNA 快速克隆到各种与 Gateway 技术兼容的目的载体上,不需要进行酶切和连接反应。但存在获得入门克隆过程中相关反应酶制剂价格昂贵,且药品订购时间较长等问题。通过对入门载体 pDONR207 的改造,使之产生 3’端具有单个 T-末端的线性化的入门载体,采用 TA 克隆的方法替代 BP 反应,从而简便、经济和快速地获得入门克隆。利用改造后的 Gateway 技术构建拟南芥 SOS2 基因的原核表达载体和真核表达载体,通过原核表达和原生质体瞬时表达证明通过此方法构建的表达载体在原核细胞和真核细胞中都得到了很好的表达。
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单位中国科学院昆明植物研究所; 中国科学院研究生院
