MiR-296-3p调节多囊卵巢综合征大鼠颗粒细胞凋亡的作用机制

作者：白雪; 于月新; 郑春杨; 侯聪; 李敏

来源：中国生物工程杂志, 2023, 43(04): 20-29.

DOI：10.13523/j.cb.2303008

• 多囊卵巢综合征
• miR-296-3p
• 蛋白激酶Cα
• 卵巢颗粒细胞
• 细胞凋亡

目的：探讨miR-296-3p对多囊卵巢综合征(polycystic ovary syndrome, PCOS)大鼠颗粒细胞凋亡的影响。方法：全自动化学发光免疫分析法检测PCOS大鼠血清雌二醇(estradiol, E2)、孕酮(progesterone, P)、睾酮(testosterone, T)水平；利用苏木素-伊红染色(hematoxylin-eosin staining, HE)检测卵巢病理学改变；TUNEL法检测卵巢细胞凋亡；qPCR检测卵巢miR-296-3p表达水平；将各质粒分别转染卵巢颗粒细胞(ovarian granulosa cells, GCs)后分为miR-NC、miR-296-3p mimic、miR-296-3p inhibitor、miR-296-3p mimic+Vector、miR-296-3p mimic+PRKCA和miR-296-3p mimic+PRKCA+NF-κB组，以未处理的GCs为对照组；Western blot法检测p38、p-p38及NF-κB的表达水平，利用StarBase在线预测和双荧光素酶报告实验验证miR-296-3p与PRKCA的靶向关系，流式细胞术检测细胞凋亡率。结果：与对照组相比，PCOS大鼠卵巢中E2、P、T水平升高，细胞凋亡比例增加，miR-296-3p表达升高；miR-296-3p与PRKCA具有靶向关系，在3′UTR区存在结合位点；与miR-NC组相比，miR-296-3p mimic组PRKCA mRNA表达水平显著下调，p-p38/p38和NF-κB表达上调，miR-296-3p inhibitor组PRKCA mRNA表达水平显著上调，p-p38/p38和NF-κB表达下调；与miR-NC组相比，miR-296-3p mimic组和miR-296-3p mimic+Vector组细胞凋亡比例显著上调；与miR-296-3p mimic组和miR-296-3p mimic+Vector组相比，miR-296-3p mimic+PRKCA组卵巢颗粒细胞凋亡比例显著下调；与miR-296-3p mimic+PRKCA组相比，miR-296-3p mimic+PRKCA+NF-κB组卵巢颗粒细胞凋亡比例显著上调。结论：miR-296-3p通过靶向PRKCA激活p38 MAPK/NF-κB信号通路介导多囊卵巢综合征大鼠颗粒细胞凋亡。