水稻cDNA酵母表达文库的构建及重金属镉胁迫相关基因的初步筛选

作者：王晶; 高燕; 李静; 杨松光; 吴克强; 张美

来源：广东农业科学, 2012, (13): 143-145+148.

DOI：10.16768/j.issn.1004-874x.2012.13.039

• 水稻
• 重金属
• Gateway技术
• cDNA文库 rice
• heavy metal
• Gateway technique
• cDNA library

提取经重金属胁迫处理的水稻幼苗总RNA并纯化mRNA,采用SMART技术反转录成cDNA,利用Gateway技术将cDNA构建到入门载体pDONR222后,再经LR反应重组到酵母表达载体pYES2-DEST52上,获得水稻cDNA表达文库。检测表明,所构建的cDNA文库能达到后续试验要求。使用重金属镉敏感酵母突变株ycf1Δ进行水稻中重金属镉耐受相关基因筛选,获得多个可以恢复表型的酵母单克隆。提取质粒并测序分析后可知涉及到水通道蛋白、蛋白酶抑制剂以及金属硫蛋白等不同基因,筛选所得基因即为水稻应答重金属镉胁迫的候选基因。

• 单位
  中国科学院; 中国科学院大学; 中国科学院华南植物园