基于DPO引物检测猪流行性腹泻病毒荧光定量RT-PCR方法的建立及初步应用

作者：王以欣; 王紫薇; 汉武娇; 王丽; 姜艳平; 崔文; 周晗; 乔薪瑗; 唐丽杰; 李一经; 徐义刚^*

来源：中国预防兽医学报, 2019, 41(07): 710-715.

• 猪流行性腹泻病毒
• DPO引物
• 荧光定量RT-PCR

为建立快速、准确检测猪流行性腹泻病毒(PEDV)的方法,本研究以PEDV的N基因为靶基因,基于双启动寡核苷酸引物(DPO),经过条件优化,建立了检测PEDV的荧光定量RT-PCR方法。结果显示,DPO引物的有效退火温度范围较宽(45℃～65℃);在测试的10种病毒中仅PEDV为阳性扩增结果,其余病毒为阴性结果,特异性较强;对PEDV质粒标准品的检测限可达1.64×101拷贝/μL,敏感性较高;组内、组间重复性结果的变异系数均小于1%,重复性较好。利用该方法对采集的272份临床仔猪腹泻样品(粪便、小肠组织)进行检测,结果显示,共检出PEDV阳性样品39份,阳性率为14.34%,与常规RT-PCR方法检测结果的阳性符合率为92.31%;本研究建立方法检测的阳性样品经PEDV N基因测序鉴定,确实均为PEDV阳性样品。本研究建立的基于DPO引物检测PEDV的荧光定量RT-PCR方法为PEDV的准确检测和流行病学调查提供技术支持。

• 单位
  东北农业大学; 农业部