牦牛源C型产气荚膜梭菌动物致病性及其β毒素基因生物信息分析

作者：吴丹; 黄家旗; 罗润波; 郭欣冉; 吕家煌; 宋仁德; 索朗斯珠^*

来源：中国兽医学报, 2022, 42(06): 1184-1193.

DOI：10.16303/j.cnki.1005-4545.2022.06.13

• 牦牛
• 产气荚膜梭菌
• 病理切片
• β毒素
• 生物信息分析

复苏培养本实验室保存的牦牛源C型产气荚膜梭菌Qinghai-06(GenBank登录号：MW980095),利用振荡比浊法、动物试验和病理切片方法对菌株生长曲线及动物致病性进行研究，随后通过对β毒素基因扩增、克隆、双向高通量测序、生物软件分析等分子生物学与生物信息学方法对其编码蛋白的一级结构、二级结构、三级结构、蛋白特殊区域及B细胞线性抗原表位进行分析。结果显示，牦牛源C型产气荚膜梭菌Qinghai-06菌株按照5%体积分数接种后，2～6 h为对数期；菌液D600 nm值与稀释倍数的关系式为y=-0.857ln(x)+2.236;菌液D600 nm值与菌落CFU的关系式为：y=0.881x-0.017;菌株对感染小鼠的LD50为0.408×108 CFU/mL。H.E染色镜检观察到可引起肠、脑、肾脏、肝脏、脾脏组织病理变化。β毒素基因序列长927 bp,共编码309个氨基酸，分子式为C1535H2396N406O502S9,相对分子质量为34.9 ku, pI=5.52,不稳定指数为35.91,亲水性总平均值为-0.567,含有全部20种氨基酸，为单体，含1个Zn2+配体。结果表明：牦牛源C型产气荚膜梭菌Qinghai-06属强致病菌株，其β毒素蛋白为含丰富无规则卷曲结构和潜在磷酸化位点的、稳定的亲水性蛋白，有效B细胞线性抗原表位主要集中于140～290区段。

• 单位
  西藏农牧学院; 玉树藏族自治州畜牧兽医工作站; 动物科学学院