基于芽孢杆菌来源的苯丙氨酸羟化酶的大肠杆菌重组菌株生产5-羟基色氨酸

作者：焦巧瑞; 师丹阳; 李海北; 侯健; 金敏^*; 白立改^*

来源：营养学报, 2021, 43(03): 294-297.

DOI：10.13325/j.cnki.acta.nutr.sin.2021.03.013

• 5-羟基色氨酸
• 苯丙氨酸羟化酶
• 大肠杆菌

目的建立5-羟基色氨酸(5-HTP)的生物制备方法。方法合成芽孢杆菌(Bacillussp.)的苯丙氨酸羟化酶(pah)基因并克隆于载体pTIG-Trx中,将构建完的重组质粒pTIG-Trx-Ba-PAH转入大肠杆菌BL21(DE3)中,获得PAH生产的重组菌株;该菌株经异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达和超声波破碎后,通过体外催化反应,将色氨酸催化成5-HTP;最后,采用聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)和蛋白质印迹法(Western blot)验证PAH蛋白;采用高效液相色谱检测5-HTP含量。结果经表达的PAH蛋白分子量约为64.37 ku,经Western blot验证,可与PAH抗体特异性结合;通过体外催化反应,5-HTP生成产量为67.4 mg/L。结论成功构建了用于生产PAH的大肠杆菌重组菌株pTIG-Trx-Ba-PAH/BL21,并完成了5-HTP的生物制备。[营养学报,2021,43(3):294-297]

• 单位
  河北大学