不同核酸提取方法用于环介导等温扩增检测大西洋鲑鱼的比较分析

作者：李秋萍; 许文杰; 崔晓文; 操敏; 熊晓辉; 熊雄^*

来源：食品与发酵工业, 2022, 48(10): 240-254.

DOI：10.13995/j.cnki.11-1802/ts.028858

• 环介导等温扩增
• 大西洋鲑鱼
• 核酸提取
• 灵敏度

环介导等温扩增(loop-mediated isothermal amplification, LAMP)已被广泛应用于鱼类真伪鉴定。LAMP扩增成功的重要前提是获得高质量的核酸。目前为止，DNA提取方法种类繁多，但对适用于LAMP的提取方法缺乏全面的研究。该研究采用十二烷基磺酸钠(sodium dodecyl sulfonate, SDS)、Tagliavia、Heating以及2种常用市售试剂盒(Takara, Tiangen),对4种前处理的大西洋鲑鱼组织进行DNA提取，并对DNA得率、纯度、LAMP等方面进行比较分析。结果表明，这5种提取方法从不同前处理的样品中获得的DNA均可用于LAMP反应，采用琼脂糖凝胶电泳及荧光可视化检测都可观测到阳性结果。但在实时LAMP检测中，不同提取方法和不同样品前处理方式的Ct值均存在着极显著差异(P<0.01)。SDS和Tiangen这2种提取方法虽然DNA得率较低，但可获得高纯度的DNA,并在LAMP反应中有着更低的检测限。该研究结果为大西洋鲑鱼组DNA的提取和检测以及适用于LAMP技术的不同提取方法的研究提供了参考依据。

• 单位
  南京工业大学