摘要
目的探讨常春藤皂苷元(Hederagenin)对人胶质瘤(Glioma)细胞株U251MG凋亡的影响和机制。方法应用不同剂量的Hederagenin作用于人胶质瘤细胞株U251MG 48 h后应用噻唑蓝(MTT)法检测细胞活性。U251MG细胞分为实验组(给与80 μg/ml Hederagenin干预)及对照组[给与无血清的杜尔伯科改良伊格尔(DMEM)培养液], 流式细胞术检测细胞凋亡;划痕实验和Transwell小室实验检测细胞的迁移侵袭能力;蛋白质印迹法(Western blot)技术检测各组U251MG细胞凋亡及迁移侵袭相关蛋白的变化。多组数据间比较采用单因素方差分析, 两组数据比较采用t检验。结果 MTT结果显示, 实验组U251MG细胞活性明显低于对照组, 且随药物剂量增加效应更加明显(F=288.946, P<0.01)。流式细胞术(FCM)结果显示, Hederagenin作用于U251MG细胞48 h后实验组细胞凋亡率明显高于对照组[(21.07±4.85)%比(5.12±1.52)%, t=7.687, P<0.01], 实验组细胞的迁移率明显低于对照组[(58.44±6.65)%比(80.26±6.86)%, t=-5.594, P<0.01), 实验组细胞的跨膜细胞数明显少于对照组(63.33±7.69比115.83±9.35, t=-10.623, P<0.01)。Western blot结果显示, Hederagenin作用后实验组U251MG细胞凋亡相关蛋白Survivin、bcl-2表达明显低于对照组(0.767±0.067比1.091±0.174, 0.800±0.086比1.149±0.165, t=-3.010、-3.249, P<0.05), 而丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶1(RIPK1)、丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶3(RIPK3)、裂解的半胱氨酰天冬氨酸特异性蛋白酶-8(cleave-Caspase-8)蛋白的表达明显高于对照组(1.121±0.134比0.380±0.037、0.604±0.067比0.417±0.043、1.310±0.185比0.823±0.124, t=9.233、4.068、3.787, P<0.05);侵袭相关蛋白基质金属蛋白酶(MMP)-2、MMP-9、N-钙黏蛋白(N-cadherin)表达明显低于对照组(0.323±0.055比1.055±0.145、0.449±0.060比0.803±0.082、0.505±0.059比0.881±0.095, t=-8.176、-6.034、-5.824, P<0.01), 而E-钙黏蛋白(E-cadherin)蛋白的表达明显高于对照组(0.681±0.056比0.418±0.050, t=6.068, P<0.01)。结论 Hederagenin对胶质瘤细胞有明显的抑制作用, 该作用与Hederagenin促进细胞凋亡、抑制细胞迁移侵袭能力有关。
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单位天津大学; 沧州市中心医院