miR-582-5p通过调控Wnt通路影响胃癌AGS细胞的增殖和耐药

作者：刘栋; 王建华; 段降龙; 孙学军; 刘斌; 武敏; 刘思达; 毛智军; 张涛; 薛飞; 普彦淞; 李晓帆; 高增战; 龙延滨

来源：山西医科大学学报, 2018, 49(05): 470-476.

DOI：10.13753/j.issn.1007-6611.2018.05.004

• 胃癌
• miR-582-5p
• LGR5
• 细胞增殖
• 细胞周期
• 奥沙利铂
• 耐药性

目的观察micro RNA-582-5p(miR-582-5p)对人胃癌细胞AGS增殖和耐药功能的影响,探讨其分子机制。方法miR-582-5p mimics通过脂质体转染人胃癌AGS细胞(实验组),同时设置阴性对照组(转染Negative Control)和空白对照组(untreated cell)。实时荧光定量PCR、MTT法、流式细胞技术分别检测转染3组细胞后miR-582-5p的表达变化、增殖能力、药物敏感性、细胞周期;Target Scan Human网站预测LGR5基因可能是miR-582-5p的靶基因之一,并用双荧光素酶报告载体验证其靶基因;Western blot检测3组细胞中cyclin D1、c-myc、survivin和LGR5蛋白的表达。结果相比阴性对照组和空白对照组,实验组中AGS细胞增殖能力下降,在第72,96小时生长速度明显抑制,差异有统计学意义(P<0.05)。相比阴性对照组和空白对照组,实验组细胞周期被抑制,G0/G1期细胞比例明显增多(P<0.05),S期细胞比例减少(P<0.05),细胞对奥沙利铂的敏感性增强,耐药性降低(P<0.05)。相比阴性对照组和空白对照组,实验组含有LGR5基因的3’UTR荧光素酶活性明显得到抑制,而且Wnt通路下游靶基因cyclin D1、c-myc、survivin和LGR5蛋白表达下调,差异有统计学意义(P<0.05);阴性对照组和空白对照组比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论 miR-582-5p在胃癌细胞中可作为抑癌因子调控胃癌细胞增殖能力、化疗药物奥沙利铂耐药性、细胞周期变化,并通过下调LGR5调控Wnt信号通路,推测miR-582-5p和胃癌的发生和发展有关。

• 单位
  西安交通大学第一附属医院; 陕西省人民医院