鸭IFNα-AvBD2融合蛋白在毕赤酵母中的分泌表达及生物学活性检测

作者：豆子航; 李秀丽; 庞洪泽; 韩颖; 雷白时; 赵款; 庞敬红; 袁万哲^*

来源：农业生物技术学报, 2022, 30(05): 957-965.

• α干扰素(IFNα)
• β防御素2 (AvBD2)
• 毕赤酵母
• 融合蛋白
• 抗菌活性
• 抗病毒活性

鸭(Anas platyrhynchos) α干扰素(interferon α, IFNα)具有广谱的抗病毒活性，禽β防御素2 (avianβ-defensin 2, AvBD2)具有广谱的抗菌活性。本研究利用毕赤酵母(Pichia pastoris)分泌表达鸭IFNα-Av BD2融合蛋白并明确IFNα-AvBD2的生物学活性，对于现有无抗养殖条件下的鸭疫病防控具有重要意义。本课题组在前期工作中已成功构建了原核表达质粒pET32a-AplIFNα-AvBD2，并在大肠杆菌(Escherichia coli)中成功表达。本研究以实验室保存的pET32a-AplIFNα-AvBD2为模板，通过PCR方法扩增得到AplIFNα-AvBD2成熟蛋白的基因片段，构建重组质粒pPICZαA-AplIFNα-AvBD2；将线性化的重组质粒电转化至毕赤酵母KM71H感受态细胞，阳性重组菌经甲醇诱导表达，对表达产物进行体外生物学活性研究。SDS-PAGE和Western blot结果显示，AplIFNα-AvBD2重组蛋白分子量约为24 kD；琼脂扩散法和微量稀释法表明重组蛋白对金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)和大肠杆菌有较强的抗菌活性；细胞病变抑制法检测重组蛋白抗病毒活性为1.2×105 U/mL，比活性为5.2×105 U/mg;MTT细胞毒性试验显示重组蛋白对非洲绿猴肾细胞(Vero)无毒。上述结果说明，AplIFNα-AvBD2可在毕赤酵母中分泌表达，同时具有抗菌活性和抗病毒活性。本研究为AplIFNα-AvBD2的进一步应用提供了基础资料。

• 单位
  河北农业大学