科研之友
微信
新浪微博
Facebook
分享链接
摘要
目的探讨成纤维细胞生长因子10(FGF10)对神经元损伤的保护作用及其潜在的分子机制。方法剥离新生SD乳鼠的脑组织并提取其中的皮层神经元, 将其种植于含L-多聚赖氨酸的孔板上进行培养, 并分为正常组、髓鞘碎片组和髓鞘碎片+FGF10组, 其中髓鞘碎片组神经元在培养4 h后添加一定含量的髓鞘碎片溶液(终浓度为10 μg/mL), 而髓鞘碎片+FGF10组神经元同时在培养基内添加髓鞘碎片和FGF10溶液(终浓度为4.3 nmol/L)。培养1周后, 应用TUNEL染色、流式细胞术检测各组神经元的凋亡情况, 应用活/死细胞染色、CCK-8法检测各组神经元的生存情况, 应用Western blotting、免疫荧光双标染色检测各组神经元内凋亡相关蛋白、微管相关蛋白和RAS同源基因家族成员A(Rho A)/Rho A相关蛋白激酶(ROCK)信号通路相关蛋白的表达。结果与正常组相比, 髓鞘碎片组中TUNEL染色所示神经元凋亡率明显升高, 流式细胞术所示早期神经元凋亡率明显升高, 活化半胱氨酸蛋白酶-3(caspase-3)蛋白表达明显升高, Bcl-2/Bax值明显降低, 活/死细胞染色所示神经元死亡率明显升高, CCK-8法所示神经元生存率明显降低, 乙酰化微管蛋白/酪氨酸微管蛋白(Ace/Tyr-tubulin)值明显降低, Tau蛋白表达明显降低, Ace/Tyr-tubulin荧光强度比值明显降低, Rho A、ROCK蛋白表达明显升高, Rho A荧光强度值明显升高, 差异均有统计学意义(P<0.05)。与髓鞘碎片组相比, 髓鞘碎片+FGF10组中TUNEL染色所示神经元凋亡率明显降低, 流式细胞术所示早期神经元凋亡率明显降低, 活化caspase-3蛋白表达明显降低, Bcl-2/Bax值明显升高, 活/死细胞染色所示神经元死亡率明显降低, CCK-8法所示神经元生存率明显升高, Ace/Tyr-tubulin值明显升高, Tau蛋白表达明显升高, Ace/Tyr-tubulin荧光强度比值明显升高, Rho A、ROCK蛋白表达明显降低, Rho A荧光强度值明显降低, 差异均有统计学意义(P<0.05)。结论 FGF10可能通过抑制Rho A/ROCK信号通路进而促进神经元内微管稳定, 从而对抗神经元在髓鞘碎片环境下发生的凋亡并提高其生存率。
-
单位宁波市北仑区人民医院
