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摘要
目的探讨严重脓毒症幼猪生化指标、肺部病理损伤与免疫机制间的相互关系, 以及参附注射液的干预作用。方法将2～3月龄巴拿马香猪按随机数字表法分为假手术组(Sham组;静脉注射生理盐水)、脂多糖(LPS)致严重脓毒症模型组(LPS组;静脉注射LPS 1 mg/kg, 0.5 mg·kg-1·h-1维持12 h)、参附注射液干预组(SF组;制模同时静脉注射参附注射液10 mL/kg, 每日2次), 每组5只。制模后48 h取血检测C-反应蛋白(CRP)、降钙素原(PCT)、氧合指数(PaO2/FiO2)、剩余碱(BE)、血乳酸(Lac)等生化指标;取外周血行流式细胞检测, 分析中性粒细胞数目〔髓过氧化物酶阳性(MPO+)〕及其激活亚群CD11b+ CD64+、M1型巨噬细胞(CD80+ CD64+)、CD4+和CD8+ T细胞的变化;采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测血浆细胞因子水平;苏木素-伊红(HE)染色观察肺组织病理损伤;采用反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测肺组织损伤相关分子及其受体、趋化因子、炎性因子、血管内皮相关分子、紧密连接蛋白的mRNA表达。结果与Sham组比较, LPS组CRP、PCT、Lac水平明显升高, PaO2/FiO2、BE明显下降;外周血CD80+ CD64+、CD11b+ CD64+、MPO+、CD4+和CD8+ T细胞数、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平明显降低, 白细胞介素-10(IL-10)、内皮细胞生长因子(VEGF)水平明显升高;肺组织高迁移率族蛋白B1(HMGB1)、晚期糖基化终末产物受体(RAGE)、促血管生成素2/1(Ang2/Ang1)的mRNA表达均明显升高, Toll样受体9(TLR9)、趋化因子(CXCL9、CXCL10)、TNF-α、IL-27、内皮细胞TEK酪氨酸激酶2(TIE2)、紧密连接蛋白血管内皮-钙黏蛋白(VE-CAD)和封闭蛋白(Occludin)的mRNA表达均明显下降;HE染色显示, 肺泡腔炎性细胞浸润渗出、肺泡实变及肺泡间质层明显增厚、肺气肿。与LPS组比较, SF组Lac明显下降(mmol/L:4.2±1.0比6.3±1.1, P<0.05), BE、PaO2/FiO2明显升高〔BE(mmol/L):-6.4±2.6比-11.6±2.5, PaO2/FiO2(mmHg, 1 mmHg=0.133 kPa):180±36比105±35, 均P<0.05〕, CD80+ CD64+、CD11b+ CD64+、MPO+细胞比例均明显上升〔CD80+ CD64+:(7.13±2.01)%比(3.80±0.46)%, CD11b+ CD64+:(8.33±2.55)%比(2.15±0.47)%, MPO+:(21.22±2.33)%比(8.31±0.46)%, 均P<0.05〕;肺组织HMGB1、RAGE的mRNA表达有一定程度下降〔HMGB1 mRNA(2-ΔΔCT):1.81±0.45比2.23±0.85, RAGE mRNA(2-ΔΔCT):6.69±3.48比11.60±6.91, 均P<0.05〕, CXCL9和TIE2的mRNA表达有一定程度上升〔CXCL9 mRNA(2-ΔΔCT):1.06±0.63比0.50±0.12, TIE2 mRNA(2-ΔΔCT):1.42±0.68比0.27±0.16, 均P<0.05〕;肺组织病理改变明显减轻。结论 BE、Lac、PaO2/FiO2的加重, 免疫耗竭、麻痹和无能, 可能是导致严重脓毒症幼猪肺脏致死性损伤的重要因素, 该损伤可能与HMGB1及其受体RAGE过度活化, TLR9和相应趋化因子及炎性因子受到抑制, 导致血管内皮细胞损伤加重和紧密连接蛋白表达减少的毛细血管渗漏机制相关。参附注射液改善严重肺炎并脓毒症的免疫紊乱可能与上调外周血M1型巨噬细胞和激活中性粒细胞、抑制HMGB1及其受体RAGE表达、上调CXCL9和TIE2表达有关。
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单位河南省人民医院; 郑州大学
