摘要
目的 探究上调miR-155-5p对小鼠脊柱结核病小鼠的影响并探究破骨相关信号通路RANK/NF-κB信号通路及其磷酸化在此过程中发挥的作用。方法 将40只C57BL/6小鼠分为对照组(n=10),模型组(n=10),NC组(n=10)和实验组(n=10),小鼠脊柱局部注射浓度为108 CFU/ml的H37Rv标准菌株悬液0.1 ml建立脊柱结核病模型,对照组注射等体积0.9%氯化钠溶液。NC组和实验组在模型建立后分别通过尾静脉注射miR-NC及miR-155-5p agomir,对照组和模型组注射等量0.9%氯化钠溶液,饲养8周后取脊柱标本送Micro-CT扫描检测计骨小梁数目和厚度,抗酒石酸酸性磷酸酶(Trap)染色观察破骨细胞数量,qPCR检测各组小鼠外周血中miR-155-5p表达水平,酶联免疫吸附剂测定法(Elisa)检测外周血白介素1-β(IL-1β),白介素-6(IL-6),白介素21(IL-17),肿瘤坏死因子α(TNF-α),Western blot检测结核病灶组织破骨相关蛋白核因子kB受体激活剂(RANK),核因子κB(NF-κB)及磷酸化核因子κB(p-NF-κB)蛋白的表达水平。结果 qPCR结果表明与对照组比较,模型组和NC组小鼠miR-155-5p表达显著降低,实验组小鼠miR-155-5p显著升高(P<0.01),与对照组比较,模型组和NC组小鼠骨小梁数目和厚度均显著降低,实验组小鼠骨小梁数目和厚度均显著显著升高(P<0.01),Trap染色结果表明与对照组比较,模型组和NC组小鼠破骨细胞比例显著升高,而实验组破骨细胞显著降低。Elisa结果表明与对照组比较,模型组和NC组小鼠外周血炎性因子表达水平显著升高,实验组组外周血炎性因子表达显著降低(P<0.01)。Westernblot结果表明与对照组比较,模型组和NC组小鼠RANK、NF-κB及p-NF-κB蛋白表达具有升高趋势(P<0.01),实验组则有下降趋势(P<0.01)。结论 脊柱结核病小鼠外周血miR-155-5p表达显著降低,上调miR-155-5p表达可以对小鼠脊柱结核具有保护作用,其机制可能与抑制炎性因子的释放及RANK/NF-κB信号通路的调控和磷酸化相关。
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单位长沙市中心医院