云南栘(木衣)SRAP-PCR反应体系的建立及引物筛选

作者：陈璨; 石辰; 王大玮^*; 彭劲谕; 段安安

来源：云南农业大学学报：自然科学版, 2021, 36(06): 1037-1043.

• 云南栘(木衣)
• SRAP标记
• 引物筛选

【目的】建立云南栘(木衣)SRAP-PCR最佳反应体系并筛选SRAP-PCR多态性引物组合。【方法】以木里、澜沧和盈江3个天然群体的云南栘(木衣)嫩叶为试验材料,采用改进后的CTAB法提取云南栘(木衣)基因组DNA。利用L16(45)的正交设计对Taq DNA聚合酶、Mg2+、dNTPs、模板DNA及引物5种因素进行优化,建立云南栘(木衣)SRAP-PCR最佳反应体系,并从100对引物组合中筛选SRAP-PCR多态性较高的引物组合。【结果】云南栘(木衣)SRAP-PCR最佳反应体系(25μL):Taq DNA聚合酶0.5 U,Mg2+2.5 mmol/L,dNTPs0.25 mmol/L,模板DNA 80 ng,引物0.8μmol/L。各因素对云南栘(木衣)SRAP-PCR反应体系的影响由小到大排列为:dNTPs<模板DNA<Taq DNA聚合酶<Mg2+<引物。利用木里、澜沧和盈江3个天然群体的云南栘(木衣)基因组DNA对建立的体系进行验证,筛选出的20对引物组合共扩增出212个位点,其中多态性位点187个,占比为88.21%。【结论】建立了稳定可靠的云南栘(木衣)SRAP-PCR体系,为后续云南栘(木衣)遗传多样性的研究提供支持。

• 单位
  西南林业大学