氯硝柳胺对光滑双脐螺氧化磷酸化的影响研究

作者：张苏阳; 邢云天; 袁轩; 曲国立; 姚甲凯; 戴建荣

来源：中国寄生虫学与寄生虫病杂志, 2022, 1-7.

• 光滑双脐螺
• 氯硝柳胺
• 线粒体膜电位
• 氧化磷酸化

目的 研究氯硝柳胺对光滑双脐螺氧化磷酸化的影响,探讨氯硝柳胺的杀螺机制。方法 用线粒体提取试剂盒提取光滑双脐螺成螺线粒体,考马斯蓝染色法检测提取线粒体蛋白含量,用线粒体复合体Ⅳ活性检测试剂盒检测提取过程中组织破碎液、丢弃上清和线粒体悬液中复合体Ⅳ活性以评价提取线粒体的纯度。用线粒体复合物活性检测试剂盒提取光滑双脐螺的线粒体复合物Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ,每种复合物各分成0.2μg/ml、1.0μg/ml组和二甲基亚砜(DMSO)组,分别加入终浓度为0.2和1.0μg/ml的氯硝柳胺、0.5%DMSO,分别测定不同波长处的吸光度(A值),计算复合体的活力值。在96孔板中每孔加人蛋白浓度为33μg/ml的线粒体悬液,分别加入终浓度0.2、1.0μg/ml的氯硝柳胺(0.2μg/ml和1.0μg/ml组)或0.5%DMSO (DMSO组),测定25℃条件下10、20、30 min的A_(520)值,计算线粒体膜通透性转运孔(mPTP)开放度。在96孔板中每孔加入含终浓度为5μg/ml的JC-1染料、蛋白浓度为0.1 mg/ml的线粒体悬液,0.2、0.4、0.6、0.8、1.0μg/ml分别加入终浓度为0.2、0.4、0.6、0.8、1.0μg/ml的氯硝柳胺,氰化羰基-3-氯苯腙(CCCP)组加入20μg/ml的CCCP作阳性对照组,DMSO组加入0.5%的DMSO作阴性对照组,在激发光485 nm、发射光590 nm、25℃条件下连续检测荧光强度30min。组间比较采用单因素方差分析方法。结果 提取获得的线粒体总蛋白浓度为(4.24±0.11) mg/ml,组织破碎液、丢弃上清和线粒体悬液中电子传递链复合物Ⅳ活性分别为(14.88±1.80)、(5.60±0.96)、(24.19±3.53) U/mg,3组间差异有统计学意义(F=46.92,P<0.01)。0.2、1.0.μg/ml组与DMSO组的复合物Ⅰ活性分别为(523.98±120.37)、(559.74±238.48)、(796.64±218.79) U/mg;复合物Ⅱ各组活性分别为(3.70±0.36)、(3.54±1.90)、(5.47±2.18) U/mg;复合物Ⅲ各组.活性分别为(6.03±0.79)、(5.01±0.80)、(5.82±0.69) U/mg;复合物汉各组活性分别为(31.20±3.99)、(32.08±3.20)、(30.82±4.21...

• 单位
  江苏省血吸虫病防治研究所