固定化天冬氨酸酶制备(R)-3-氨基丁酸

作者：张飞龙; 杨卫华; 陈明亮; 严燕兵; 唐云平; 肖延铭^*

来源：生物加工过程, 2020, 18(05): 556-560.

• 天冬氨酸酶
• 巴豆酸
• (R)-3-氨基丁酸
• 固定化

从芽孢杆菌Bacillus sp.YM55-1基因组中克隆得到天冬氨酸酶基因,以pET-28a(+)为载体构建天冬氨酸酶基因的表达载体pET-28a(+)-Asp,将天冬氨酸酶基因进行定点突变,在E.coli BL21(DE3)系统中实现了天冬氨酸酶的异源表达。利用重组的天冬氨酸酶,以氨水、(NH4)2SO4为辅料,将底物巴豆酸转化为(R)-3-氨基丁酸。将天冬氨酸酶的工程菌制备成固定化细胞,通过反应条件的优化研究,提高底物的转化率。结果表明:天冬氨酸酶最适pH为9.0,最适反应温度为40℃。在此反应条件下,加入30 g/L固定化细胞,转化22 h,(R)-3-氨基丁酸质量浓度达到220 g/L,对映体过量值e.e.s≥99.95%,底物转化率达到98%,固定化细胞重复使用次数不低于24次。

• 单位
  医药学院; 浙江海洋大学