表达小反刍兽疫病毒H基因的山羊痘病毒通用转移载体的构建及鉴定

作者：邵长春; 张强; 吴国华; 颜新敏; 李健; 王建科; 卢晓丽; 赵志荀; 崔丽凡; 高世功

来源：安徽农业科学, 2009, (20): 9384-9386,9404.

DOI：10.3969/j.issn.0517-6611.2009.20.030

• 羊痘病毒
• H基因
• 转移载体
• 构建
• 鉴定

[目的]研制小反刍兽疫羊痘活载体疫苗.[方法]利用PCR技术扩增小反刍兽疫病毒H基因,克隆到pGEM-T easy载体,Nhe Ⅰ和Hind Ⅲ双酶切重组质粒,将目的片段插入到真核表达载体pEGFP-N1- P7.5中,得到重组载体pEGFP-N1-P7.5-H,重组载体Hind Ⅲ、Nhe Ⅰ双酶切片段EGFP-P7.5-H平末端连接到Kpn Ⅰ酶切后的载体pUC119-TK中,得到通用转移载体pUC119-TK-EGFP-P7.5-H.[结果]经酶切鉴定及PCR扩增检测,表明构建栽体正确.pUC119-TK-EGFP-P7.5-H转染羊痘病毒感染的BHK21细胞,48 h后报告基因表达.[结论]该研究为研制小反刍兽疫基因工程活载体疫苗奠定基础.

• 单位
  中农威特生物科技股份有限公司; 中国农业科学院兰州兽医研究所; 家畜疫病病原生物学国家重点实验室; 甘肃农业大学; 农业部