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摘要
【目的】获取高纯度猴痘病毒(Monkeypox virus, MPXV)A5L蛋白，制备小鼠抗A5L高效价抗血清，为MPXV A5L蛋白功能研究及相关诊断试剂的研发提供材料。【方法】构建重组质粒pET-28a-A5L,转化大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞进行诱导表达，通过分析不同IPTG诱导浓度、诱导温度、诱导时间条件下重组蛋白A5L表达情况，筛选最佳表达条件。通过Western blotting鉴定重组蛋白A5L表达，利用SDS-PAGE分析重组蛋白可溶性。A5L蛋白经His-Bind镍柱亲和层析纯化后免疫小鼠，通过ELISA法检测抗体效价。【结果】双酶切和测序结果显示，原核表达载体pET-28a-A5L构建成功。Western blotting结果显示重组蛋白A5L在大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞中成功表达；A5L蛋白在诱导温度42℃、诱导剂(IPTG)浓度为1.6 mmol/L、诱导16 h后表达量最高，大小为40 ku。SDS-PAGE分析结果显示，A5L蛋白主要以包涵体形式存在，最佳咪唑洗脱浓度为50 mmol/L。ELISA结果显示，制备的鼠抗A5L蛋白抗体最高效价达1∶205 440。【结论】本研究成功构建了重组质粒pET-28a-A5L,并在原核表达系统中成功表达重组蛋白A5L,制备的A5L多克隆抗体具有较好的免疫原性，研究结果为进一步探究MPXV A5L蛋白的生物学功能奠定基础。
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