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摘要
为建立基于重组酶聚合酶等温扩增（RPA）技术的简单异尖线虫检测方法，本研究根据简单异尖线虫rDNA的ITS2基因序列设计特异引物，建立了简单异尖线虫的RPA检测方法。通过对反应体系的优化确定最优反应温度为40℃和最优反应时间为25 min。特异性检测结果显示，本研究建立的简单异尖线虫RPA检测方法与典型异尖线虫、抹香鲸异尖线虫、宫脂线虫、伪地新线虫和对盲囊线虫无交叉反应；该方法对简单异尖线虫基因组DNA最低检出限为10 pg/μL；人工污染检测结果表明，该方法能在100 g鲈鱼肉中检出单条简单异尖虫的混入污染，应用效果良好。因此，本研究所建立的简单异尖线虫RPA检测方法特异性强、灵敏度高、反应快速、无需昂贵设备，可应用于基层单位和现场快速检测。
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