牛传染性鼻气管炎病毒gD基因真核表达载体的构建及其在MDBK细胞中的表达

作者：贾晓雪; 刘慧珍; 张帆; 武文博; 马君艳; 倪宏波^*

来源：中国生物制品学杂志, 2020, 33(08): 894-897.

DOI：10.13200/j.cnki.cjb.002798

• 牛传染性鼻气管炎病毒
• gD基因
• MDBK细胞
• 真核表达

目的构建牛传染性鼻气管炎病毒(infectious bovine rhinotracheitis virus,IBRV)gD基因的真核表达质粒,并在MDBK细胞中表达。方法参照GenBank中BHV-1-gD基因序列,于上下游分别加入KpnⅠ、BSTBⅠ双酶切位点,连接至真核表达载体pcDNA4-myc-His中,全基因合成重组质粒pcDNA4-gD-His,经双酶切及测序鉴定正确后,转染MDBK细胞,收集上清,镍柱纯化带有His标签的重组gD蛋白,对表达及纯化的蛋白进行间接免疫荧光及Dot blot鉴定。结果质粒pcDNA4-gD-His经双酶切及测序鉴定证明构建正确。表达及纯化的重组gD蛋白相对分子质量约为61 000,纯化后的重组gD蛋白浓度为0. 85 mg/mL。表达及纯化的重组gD蛋白均可与IBRV-gD单克隆抗体发生反应,具有良好反应原性。结论已成功构建了pcDNA4-gD-His真核表达质粒,并在MDBK细胞系中成功表达,经验证重组蛋白具有良好的反应原性。

• 单位
  黑龙江八一农垦大学; 动物科技学院