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摘要
目的：建立并优化农杆菌介导的甘草内生真菌粉红粘帚菌的遗传转化体系，优选粉红粘帚菌定殖甘草的条件，为生物菌肥的开发及优质甘草的育种奠定基础。方法：分别从乙酰丁香酮浓度、共培养时间和受体真菌分生孢子浓度3个方面，对农杆菌介导的转化（ATMT）条件进行优化，并优选转化子。设计正交试验，以共培养温度、共培养时间和孢子浓度为考察因素，以定殖率为评价指标，优化粉红粘帚菌定殖甘草的条件。结果：粉红粘帚菌的最适转化条件为孢子浓度1×107 cfu·mL-1，乙酰丁香酮浓度150 μmol·L-1，共培养时间60 h，此条件下的转化效率为每1×107个受体真菌孢子可获得135个转化子。通过标记基因绿色荧光蛋白（GFP）的克隆和β-葡萄糖苷酸酶（GUS）染色结果检测了转化的准确性与稳定性。粉红粘帚菌通过浸种法定殖甘草的最佳条件为共培养温度25 ℃，共培养时间36 h，孢子浓度1×106 cfu·mL-1，此条件下定殖率71.11%。结论：本研究成功建立稳定高效的粉红粘帚菌ATMT体系和定殖甘草的技术体系，为甘草生物菌肥的开发奠定了基础。
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