p38 MAPK信号通路在脓毒症大鼠海马区神经元自噬中的作用

作者：周睿曦; 李熙鸿^*; 屈艺; 李世平; 黄群

来源：四川大学学报（医学版）, 2019, 50(04): 512-519.

DOI：10.13464/j.scuxbyxb.2019.04.011

• 脓毒症
• 神经元
• 自噬
• p38 MAPK信号通路

目的探讨p38丝裂原激活的蛋白激酶(mitogen-activated protein kinase, MAPK)信号通路在脓毒症大鼠海马区神经元自噬中的作用。方法通过盲肠结扎穿孔术(cecal ligation and puncture, CLP)建立大鼠脓毒症模型。SD大鼠随机分为假手术组(sham组)、模型组(CLP组)、溶媒组(CLP+Veh组)、p38MAPK抑制剂组(CLP+SB203580组),每组分为3、6、12、24和48 h亚组;CLP+Veh组和CLP+SB203580组分别侧脑室注射1%DMSO 5μL和0.1 mmol/L SB203580 5μL,注射后30 min建立CLP模型,sham组仅翻看盲肠后关腹,未做其他处理。监测大鼠生命体征,包括平均动脉压(mean arterial pressure, MAP)和心率(heart rate, HR);神经行为学评分了解大鼠的脑损伤情况;大鼠脑海马区组织HE染色观察病理改变;透射电镜下观察大鼠脑海马区神经元自噬过程;Western blot检测海马区微管相关蛋白1轻链3(microtubule associated protein 1 light chain 3, LC3)Ⅱ、LC3Ⅰ选择性自噬接头蛋白(p62/sequestosome-1, p62/SQSTM1)、MAPK激活蛋白激酶2(MAPK-activated protein kinase 2,MK-2)、磷酸化MK-2(phosphorylation MK-2, p-MK-2)的蛋白表达;免疫荧光染色观察大鼠海马区神经元LC3和p62/SQSTM1的表达。结果在不同时间点,CLP组大鼠MAP低于、HR高于sham组,以造模后12 h变化最明显;CLP组大鼠神经行为学评分最低,海马区组织病理改变明显,透射电镜下观察有较多自噬空泡形成。与CLP组比较,CLP+SB203580组大鼠神经行为学评分回升,海马区病理改变好转,透射电镜下自噬空泡中的包裹物降解; Western blot结果显示,与sham组比较,造模后CLP组大鼠海马组织LC3Ⅱ/LC3Ⅰ和p-MK-2/MK-2表达升高, p62/SQSTM1表达下降,前者至12 h达到高峰,后者至12 h达到谷底, CLP+SB203580组与其它组相比,在造模12 h时,大鼠海马组织LC3Ⅱ/LC3Ⅰ和p-MK-2/MK-2表达升高,而p62/SQSTM1表达进一步下降(P<0.05);免疫荧光法观察结果显示,海马区LC3和p62/SQSTM1在NeuN的定位及表达与Western blot所测得的结果一致。结论脓毒症大鼠抑制p38 MAPK信号通路,可以使自噬进一步激活,对海马区神经元起到保护作用。

• 单位
  四川大学华西第二医院; 四川大学