耐甲氧西林金黄色葡萄球菌ftsZ基因高效反义肽核酸序列筛选及其体外抗菌活性观察

作者：梁树梅; 杨莉莉; 刘华伟; 夏云

来源：中国抗生素杂志, 2020, 45(09): 867-872.

DOI：10.3969/j.issn.1001-8689.2020.09.005

• 耐甲氧西林金黄色葡萄球菌
• ftsZ
• 义寡核苷酸
• 斑点杂交

目的筛选出能与耐甲氧西林金黄色葡萄球菌ftsZ基因紧密结合的反义肽核酸序列,评价其体外抗菌活性。方法选用两种计算机软件(Mfold、RNA Structure 5.2)和斑点杂交筛选出最佳反义序列PNA,并连接穿膜肽(cell penetrating peptide,CCPs)形成肽-PNA(peptide-PNA, PPNA),另设一条与最好序列有3个错配碱基的肽核酸序列作为对照,连接穿肽形成错配的肽肽核酸(scrambled peptide-PNA, Scr PPNA)。将不同浓度的肽肽核酸处理MRSA后,间隔1h测定A600值同时做平板菌落计数,观测其对细菌生长的抑制作用。结果斑点杂交实验结果表明,计算机辅助软件设计的11条反义寡核苷酸序列中,有4条序列显示强弱不同的杂交信号,第3号探针杂交信号最强,而1条正义序列没显示任何信号,PPNA在30和40μmol/L分别具有抑菌作用和杀菌作用,并具有浓度依赖性,而Scr PPNA在高浓度时对细菌也无生长抑制作用,验证了肽核酸的特异性。结论成功的筛选出一条在体外对MRSA的生长有显著的影响的反义肽核酸序列,有望为抗MRSA感染患者提供新的治疗方案。

• 单位
  重庆医科大学附属第一医院; 成都市第三人民医院