HRV143C蛋白酶在大肠杆菌的融合表达及活性检测

作者：文中伟; 狄文娜; 董秀华; 阴彬; 强伯勤; 袁建刚; 彭小忠

来源：基础医学与临床, 2005, (07): 653-656.

• 人鼻病毒
• 3C蛋白酶
• 表达
• 纯化 human rhinovirus
• 3C protease
• expression
• purification

目的人鼻病毒3C蛋白酶具有酶切物异性强且在低温下仍保持较强酶活性的特点而被用作工具酶。为大量获得3C蛋白酶,以融合形式在大肠杆菌中高效表达3C蛋白酶。方法将编码HRV 14 3C蛋白酶的cDNA克隆到pGEX4T-1载体,在大肠杆菌BL21(DE3)中表达,经一步GST亲和层析纯化获得GST-3C,再通过体外酶切实验对GST-3C和Thrombin的酶切活性进行比较。结果每升培养产物可获得纯度≥90%的重组融合蛋白约50 mg,重组GST-3C在4℃低温下具有比Thrombin更高的酶活性。结论GST-3C蛋白酶不仅可以应用于融合蛋白的酶切,而且为引入3C蛋白酶识别位点的串联亲和纯化(TAP)...

• 单位
  医学分子生物学国家重点实验室; 中国医学科学院; 中国协和医科大学