通过正交实验和单因素实验对巨大芽孢杆菌MSP03产耐有机溶剂蛋白酶的培养基配方和发酵产酶条件进行优化。得到最佳发酵培养基配方为:糊精3 g/L,豆粕粉1 g/L,K2HPO40.1 g/L。发酵条件为:装液量70 mL/250 mL,接种量5%,初始pH 7.0,于25℃发酵36 h。通过优化,耐有机溶剂蛋白酶活性增加到248.65 U/mL,是优化前的1.7倍,具有潜在的工业应用价值。